小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1能够特异性表达成骨相关转录因子Runx-2和碱性磷酸酶等早期成骨分化表型标志物,已经被广泛应用于成骨分化的研究中。成骨细胞的来源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外组织。及人的胚胎颅骨或新生动物的颅骨为成骨细胞的常用来源。

　　小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的培养操作步骤：

　　1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

　　2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

　　3．在距离紫外灯直射范围内20-30厘米处照射2-3小时；

　　4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

　　5．将培养板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

　　小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的注意要点：

　　1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

　　2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造，并经过铬酸洗液处理；

　　3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

　　4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

　　5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。