l 细胞鉴定

种属鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

此细胞来自3月龄雄性小鼠。此AML12（α小鼠肝脏12）细胞系由来自针对人TGFα的转基因小鼠（CD1菌株，品系MT42）的肝细胞建立。通过电子显微镜观察，这些细胞表现出典型的肝细胞特征，例如过氧化物酶体和胆小管样结构。AML12细胞保留表达血清（白蛋白，α1抗胰蛋白酶和转铁蛋白）和间隙连接（连接蛋白26和32）蛋白的高水平mRNA的能力，并且仅含有乳酸脱氢酶的同工酶5。细胞表达高水平的人TGFα和较低水平的小鼠TGFα。肝脏特异性蛋白质的表达在培养中随时间降低，但通过在无血清培养基中培养细胞而重新激活。细胞不会在软琼脂中形成菌落或生长。这些细胞在免疫抑制小鼠中没有致瘤性。

l 细胞特性

1） 来源：小鼠，肝

2） 形态：上皮样细胞 贴壁生长

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

l 培养条件：

1） 准备：DMEM/F12 基础培养基     (awcell-0005)                88%

     优质胎牛血清                                                                             10%

       ITS(胰岛素+转铁蛋白+硒)    （awcell-4507）                     1%

       Dexamethasone  地塞米松（awcell-8040）                    40ng/ml

       P/S青霉素-链霉素                                                                      1%

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温：（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全:

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。