l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

该细胞源自一名58岁患有膀胱移行细胞癌的白人男性。该细胞系是非整倍体人类男性 (XY)，大多数染色体计数在三倍体范围内。然而，染色体计数范围相当广泛，从超二倍体延伸到六倍体。相对于其他正常染色体，正常染色体 N11 和 N20 的代表性不足：这两条染色体的改变形式作为标记染色体突出。N13 染色体倾向于过度表达。注意到五个标记染色体：20q+、11q+、8p+、del(1)(q31)、5p+(HSR)。其中一个 20q 与 C. O'Toole 等人的标记染色体 M1 相同，Br。J. Cancer 38: 64, 1978。其余的与这些作者指出的原始标记染色体的关系并不明确。胞内无桥粒，有大量粗面内质网及突出绒毛，电子显微镜下可观察到数目不同的粗面内质网和突出微丝。含ras (H-ras)癌基因，在裸鼠中有致癌性。

l 培养条件：

1） 准备MEM（推荐awcell-0012）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。