l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

人前列腺癌细胞LNCaP克隆FGC是从一位50岁白人男性(血型B+)的左锁骨淋巴结针刺活检中分离，该患者经确诊为前列腺癌转移。这株细胞对5-α-二氢睾酮(生长调节子和酸性磷酸脂酶产物)有响应。

l 培养条件：

1) 准备： 1640 （推荐awcell-0002）; 优质胎牛血清10%; Glutamax（invitrogen 35050） 1%; Sodium pyruvate（invitrogen 11360070) 1 %;   p/s 1%

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

培养注意事项：

a. 需使用Corning的cellbind细胞培养瓶,货号是3289 。

b. 这株细胞并不形成一致的单层，而是形成集落。传代时如胰酶消化后细胞形成聚团，可以用滴管反复吹吸打碎。

c. 该细胞仅仅轻轻地吸附在基底上，不形成汇合，很快使培养基变酸。 生长很慢。 传代后48小时内不应扰动。

d. 细胞封包、寄出时，多数细胞从培养瓶底分离，悬浮在培养基中。 收到后，在通常培养单层细胞的条件下培养24到48小时，以使细胞再贴壁。 此后可以换上新鲜培养液。 如果需要，培养瓶内容物可以收集，300g离心15分钟，以适量培养液重悬并培养到一个单独的培养瓶中。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。