l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

来源于一位36碎白人女性，MCF 10A 来源于群体中的贴壁细胞。MCF 10A 细胞系是一种非致瘤性上皮细胞系。细胞上皮唾液黏蛋白、细胞角蛋白和乳脂肪球抗原呈阳性。它们在胶原蛋白中表现出三维生长，并在融合培养物中形成圆顶。到目前为止，细胞没有显示出终末分化或衰老的迹象。该线对胰岛素、糖皮质激素、霍乱肠毒素和表皮生长因子 (EGF) 有反应。通过电子显微镜，细胞显示管腔导管细胞的特征，但不显示肌上皮细胞的特征。它们还表达通过与 MFA-Breast 和 MC-5 单克隆抗体的阳性反应检测到的乳腺特异性抗原。培养基中的钙含量对细胞的形态有很强的影响。

l 培养条件：

1）准备MEGM kit培养基 （Lonza/Clonetics,CC-3150）备注：培养基包含（A+B）

A :  MEBM基础培养液 （货号CC-3151）         

B:  细胞生长添加剂 5管 （货号CC-4136）         5管

1)  CC-4009G      BPE            2.0ml

2)  CC-4017G      hEGF           0.5ml

3)  CC-4021G      INSULIN        0.5ml

4)  CC-4031G    HYDROCORTISONE  0.5ml

5)  CC-4081G      GA-1000         0.5ml

C: 霍乱毒素（cholera toxin）（awcell-8070） (100ng/ml) 500 ul

D:  P/S青霉素-链霉素 （awcell-15140-122）         5 ml

2) 培养条件： 气相：空气，100%； 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。