l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

1976年R. Cailleau等从一位48岁白人女性肿瘤转移患者胸水中建立了MDA-MB-453细胞株，其它转移灶包括淋巴结，脑和胸水及心包腔积水。该细胞过表达FGF受体。

l 细胞特性

1） 来源：乳腺；源自转移灶：心包积液

2） 形态：上皮细胞样，混合生长，贴壁与悬浮细胞同时存在。

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

l 培养条件：

1） 准备L15（推荐awcell-0009）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件：气相：空气，100%；该细胞培养不能通入CO2， 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

注意事项：

a. 无CO2培养。如果没有条件准备空气气相100%的培养箱的，可以采用不透气密封盖的T25培养瓶来培养，培养过程中每天将细胞拿出培养箱换1-2次空气。

b. 细胞形态是贴壁生长及悬浮生长混合，贴壁细胞形态是上皮样（立方形或多边形），但也有一些单个或成团的悬浮细胞。

c. 细胞复苏后一段时间内，贴壁不牢，大部分细胞呈悬浮状态，悬浮细胞不要丢弃，换液或传代时可以将悬浮细胞收集离心后，重新加入细胞培养瓶中，继续培养。

该细胞为轻微贴壁和悬浮培养的细胞，传代可以参考以下方法：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。