l 细胞鉴定

种属鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞背景

1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠结缔组织)，细胞系L的克隆。细胞系L是最早建立的连续培养细胞系之一，而clone 929是最早的克隆株。从一只100日龄的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松结缔组织入脂肪组织中建立了亲本细胞系L。 第95代的细胞系L使用毛细管法分离单细胞建立了clone929。检测发现鼠痘病毒阴性。

l 细胞特性

1） 来源：组织：皮下结缔组织；疏松结缔组织及脂肪 品系：C3H/An；

2） 形态：成纤维细胞，贴壁生长；

3） 含量：>1x106  细胞数；

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装；

5)  用途：仅供科研使用。

l 培养条件

1） 准备MEM（推荐awcell-0012）培养基；马血清（推荐：awcell-002b）10%；双抗，1%。该细胞不能用胎牛血清培养。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

l 运输形式

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温: （2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。