HUVEC 人脐静脉内皮细胞永生化

l 细胞鉴定

免疫荧光鉴定鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库（上海中科院）

l 细胞背景

人脐静脉内皮细胞系HUVEC比较久之前由美国ATCC建系， 后来被广泛使用，但是近些年发现细胞源头存在交叉污染，目前已经被国际下架，美国也发现了细胞存在问题，于是新建一个全新的HUVE-C 但是目前这个细胞引进到国内后种子都状态很差，不能使用。因此市场上很难找到可以使用的状态好的人脐静脉内皮细胞HUVE-C细胞。本公司也是由于没有合适的细胞同时状态好也准确，所以我们做了国内原代细胞永生化建系得到一个全新的准确细胞：人脐静脉内皮细胞永生化细胞。提供单个内皮细胞marker免疫荧光鉴定。细胞叫：人脐静脉内皮细胞永生化细胞，和huve-c是同一个类型的细胞，都是属于人的脐静脉内皮细胞，只是叫法不同，并且由于是国内建系的，因此不能提供STR鉴定，而是提供免疫荧光鉴定。

l 细胞特性

1） 来源：人脐带组织

2） 形态：内皮细胞样 贴壁生长

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

l 培养条件：

1）准备内皮细胞培养体系（推荐：PriMed-awcell-002）      

内皮细胞培养基础培养基                  93%

胎牛血清（FBS）                               5%

内皮细胞培养添加剂                          1%

青霉素/链霉素，P/S                             1%

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

人脐静脉内皮细胞系HUVEC对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。