l 细胞鉴定

STR鉴定已通过

l 细胞来源

国家资源库

l 细胞特性

1） 来源：人、女性、外周血

2） 形态：成淋巴瘤细胞，悬浮和轻微的贴壁

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

6）用途：仅供科研使用。

l 培养条件：

1）准备1640（推荐：awcell-0002）基础培养基, 优质胎牛血清10 %，P/S青霉素-链霉素 1%

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

l 注意事项：

注意事项：

a.该细胞同时存在悬浮生长和轻微的贴壁状态。

b.该细胞复苏后需培养2周左右时间，才能恢复正常生长状态。

c.细胞密度不可过高，在细胞汇合前进行传代，否则容易成团。

参考传代比例: 1:3-1:6，参考换液频率: 2-3天

该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

1） 悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加*培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，具体可以参考细胞说明书）可以维持细胞的正常生长。悬浮细胞的收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2)．贴壁细胞的的消化，pbs清洗1-2次 由于细胞贴壁不牢，pbs清洗过程中会有细胞脱落，所以pbs清洗液需要收集到离心管中。清洗后的贴壁细胞按正常的贴壁细胞处理。加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%血清的培养基来终止消化。

3）将收集到的悬浮细胞，消化下贴壁细胞和pbs清洗液中的细胞以1000rpm,5min离心重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3 细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

l 运输形式：

低温：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温（2） T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

l 生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。